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RNA遺伝子改変技術VI型 CRISPR/Cas13システムでできること。 CRISPR/Cas13システムは、28 塩基の RNA 単鎖を特異的に標的とするガイド RNA (crRNA)と RNA ガイドエフェクタータンパク質(Cas13)で構されている。 私たちは、CRISPR/Cas13 システムを哺乳動物細胞内にて発現、機能させる次世代 RNA 編集システムPOiRT(Predominant Onco interactive RNA target)システムを開発して以下の研究に活用している。 ①RNAの標的化と選択的剪断（Cas13 RNAミサイル療法） ：Cas13はCas13-crRNA 成熟干渉複合体を形成するためのシス およびトランス RNA 標的切断を担う(HEPN)ドメインを有しており、crRNAが標的するRNA単鎖配列特異的にリクルートされた上で、標的RNAに対してRNAヌクレアーゼ活性を発揮する。Cas13のRNAヌクレアーゼ活性は標的RNAの存在下でのみ発揮されるが、剪断対象とするRNAは非特異的であるため、抗がん剤としての利用が期待される。 ②RNAの標的化：RNAヌクレアーゼ活性を取り除いたdead Cas13 (dCas13)を利用した、CRISPR/dCas13システムを用いて目的としたRNA 単鎖の標識化を可能とする。標識化されたRNAは、蛍光モニタリング、免疫沈降、RNAスプライシング制御、RNA顆粒などの相分離の抽出などを可能とする

Cas13 RNAミサイル療法より、Cas13の抗遺伝子治療薬としての使用に伴って、実験データセットおよび折り畳みアルゴリズムから得られたRNA構造情報を用いて、crRNA誘導Cas13システムによって一本鎖領域で転写物を標的化する効率的な方法の検証も同時に行うことが肝要となる事がわかりました。これらの見地を、私たちはRNA ミサイル療法で用いるcrRNAのデザイン方法の検証を行い、専門科学誌に発表しました。 https://www.nature.com/articles/s41598-020-68459-4 2020年7月14日 Scientific Reports誌